川芎嗪预处理促进骨髓间充质干细胞迁移的体外研究

【摘要】目的体外观察川芎嗪(Ligustrazine)预处理对骨髓间充质干细胞(bonemarrow-mesenchymalstemcells,BMSCs)迁移的影响；并从基质细胞衍生因子(stromalcell-derivedfactor-1,SDF-1)特异性受体CXCR4基因表达的角度,初步探讨川芎嗪预处理促进BMSCs体外迁移的分子机制。方法采用全骨髓贴壁法行BMSCs原代培养,流式细胞仪检测BMSCs阳性抗原(CD29、CD90)及阴性抗原(CD34、CD45)鉴定BMSCs纯度；采用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度川芎嗪(0.1-200μMol/L)预处理BMSCs6、12、24、48h后细胞活力的变化,分析川芎嗪预处理对BMSCs增殖的影响；不同浓度川芎嗪(0.1-200μMol/L)预处理BMSCs6、12、24h,行transwell细胞迁移实验和细胞—基质粘附实验,0.1%结晶紫染色细胞镜下计数,分析川芎嗪预处理的量效和时效关系；川芎嗪(25、50,100μMol/L)预处理BMSCs24h,采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测CXCR4mRNA和蛋白表达。结果采用全骨髓贴壁法可以获得生长状态良好且纯度较高的大鼠BMSCs,BMSCs呈成纤维细胞样集落,形态均一,表型鉴定结果显示P3代BMSCs阳性抗原CD29+、CD90+分别为96.9%、97.3%,阴性抗原CD34-、CD45-分别为0.2%、3.0%,能够满足后续实验需要；MTT结果表明不同浓度川芎嗪(0.1-200μMol/L)预处理6h、12h、24h对BMSCs的增殖无影响p>0.05):Transwell细胞迁移实验和细胞—基质粘附实验表明不同浓度川芎嗪(0.1-200μMol/L)预处理BMSCs6h、12h、24h显著增强BMSCs运动迁移能力和粘附能力(P<0.05),且迁移和粘附效应与川芎嗪剂量正相关,其中川芎嗪浓度为100μMol/L预处理24h后BMSCs的迁移能力最好,同时促迁移效应被CXCR4拮抗剂AMD3100完全阻断；荧光定量PCR和Westernblot结果表明,川芎嗪(25、50、100μMol/L)预处理BMSCs24h,显著上调CXCR4mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论①川芎嗪(0.1-200μMol/L)预处理BMSCs6h、121、24h对细胞活性没有影响。②川芎嗪(0.1-200μMol/L)预处理显著增加BMSCs的体外迁移和粘附能力；③川芎嗪(25、50、100μMol/L)预处理BMSCs24h显著上调CXCR4mRNA和蛋白表达水平；④川芎嗪预处理活化BMSCs迁移潜能可能与上调细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4蛋白表达有关。⑤川芎嗪可能是川芎发挥“引药上行”功效的主要有效成分
【作者】曲铁兵；
【导师】储利胜；
【作者基本信息】浙江中医药大学，中医临床基础，2014，硕士
【关键词】川芎嗪；骨髓间充质干细胞；迁移；CXCR4；

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